Метода 1: Метода екстракције (метода која се тренутно користи у мојој земљи; даје нижу чистоћу, али нуди ниже трошкове производње.)
Екстракција раствора окситоцина: Узмите 100 г осушеног праха задње хипофизе и 30 г кварцног праха, ставите их у млин и додајте дестиловану воду. Извршите екстракцију четири пута користећи исти поступак. Запремине дестиловане воде додате за сваки корак су следеће: 1,4 Л за прве две екстракције и 1,3 Л за следеће две. Свака екстракција се изводи 45 минута, након чега следи центрифугирање да се сакупи течност; преостали остатак се затим подвргава даљој екстракцији. Четири добијена екстракта се комбинују да би се добио раствор окситоцина. Укратко: сушени прах постериорне хипофизе [вода, куглични млин] → екстракт окситоцина → хроматографско одвајање.
Узмите 1500 г претходно-третираног синтетичког зеолита, додајте 20 Л 0,25% раствора сирћетне киселине и-после мешања-сипати смешу у колону за јонску{7}}измену. Када ниво раствора сирћетне киселине падне на тачку 2–3 цм изнад површине слоја зеолита, одмах унесите екстракт окситоцина. Одржавајте одговарајућу брзину протока и сакупите добијени бели, замућени елуат (ова фракција првенствено садржи окситоцин; пошто окситоцин има изоелектричну тачку [пИ] од 7,7-док вазопресин има пИ од 10,9-вазопресин лако формира позитивне јоне и тако се адсорбује на колону). Чим ниво течности екстракта падне на површину слоја зеолита, одмах додати дестиловану воду и наставити са сакупљањем замућеног елуата док не престане проток. Подесите пХ сакупљеног замућеног елуата на 3,5 користећи глацијалну сирћетну киселину. Брзо загрејте раствор у воденом купатилу до 95 степени, одржавајте ову температуру 3 минута, а затим брзо охладите раствор и ставите у фрижидер преко ноћи. Укратко: Екстракт окситоцина [ХАц, колона синтетичког зеолита] → Замућени елуат [ХАц, загревање] → Одвојени раствор → Адсорпција и елуирање. Следећег дана филтрирајте расхлађени раствор. У филтрат додати 10% муљ бентонита уз мешање (додавање 3 мЛ суспензије на 100 мЛ филтрата). Наставите да мешате 1 сат да бисте олакшали адсорпцију, а затим центрифугирајте смешу. Тестирајте супернатантну течност помоћу раствора реагенса сулфосалицилне киселине; одсуство било каквог талога указује да је процес адсорпције завршен. Ако је адсорпција непотпуна, поновите процес третмана бентонитом; затим, комбинујте преципитате бентонита добијене из оба корака адсорпције. Бентонит је елуиран четири пута коришћењем 1% сирћетне киселине (са запреминама од 1,6 Л, 1,4 Л, 1,2 Л и 0,8 Л, респективно). За сваки елуат, *терт*-бутилтрихлорид се додаје када се раствор загреје на 80 степени; температура се затим подиже на 95 степени, брзо се хлади на 25 степени и филтрира или центрифугира. Четири добијена филтрата се комбинују да би се одредила потентност и граница вазопресина. Ток процеса је следећи: Расхлађени раствор [Филтрација] → Филтрат [Бентонитна суспензија] → Адсорбат [1% ХАц] → Елуат. Припрема ињекције окситоцина:
Испитани раствор окситоцина, који је испунио стандарде квалитета, разблажи се до концентрације од 5 У/мЛ или 10 У/мЛ. Затим се филтрира кроз левак од синтерованог стакла Но. 4 или Но. 5, пуни се у ампуле и стерилише помоћу водене паре на 100 степени 30 минута да би се добио коначни производ. Ток процеса је следећи: раствор окситоцина (одобрен тестом) [филтрација, пуњење, стерилизација] → ињекција окситоцина.
Регенерација синтетичког зеолита: Синтетички зеолит се два пута испере дестилованом водом. Затим се дода 1,5 Л воде (израчунато на основу 500 г зеолита) и 150 г натријум хлорида, па се смеша меша 2 сата да се испере и уклони вазопресин. Зеолит се затим испере дестилованом водом све док не остану јони хлорида. Дода се одговарајућа количина воде и пХ се подеси на 9 коришћењем натријум хидроксида; смеша се меша 30 минута, након чега се супернатант декантује. Зеолит се испере дестилованом водом, пХ се подеси на 5,5–6 сумпорном киселином и поново опере водом до скоро неутралног. Затим се филтрира да се уклони вишак воде и суши на 105 степени за будућу употребу. Пре употребе додаје се одговарајућа количина воде, а пХ се подешава коришћењем глацијалне сирћетне киселине уз мешање како би се омогућило намакање. Припрема 10% бентонитне суспензије: Бентонит и вода се мешају у односу масе-према-запреминама 1:10. Смеша се меље око 1 сат, а за то време се додаје сирћетна киселина да би се одржао стабилан пХ од 3,5. Добијени раствор се затим чува у фрижидеру за будућу употребу. Метод 2: Хемијска синтеза. Прво, хептапептидни амид (сегменти 3–9) се синтетише почевши од бензилоксикарбонил-леуцин *п*-нитрофенил естра; следеће, синтетише се бензилоксикарбонил-С-бензилцистеин-тирозин азид (сегменти 1–2); а у трећем кораку се синтетише окситоцин.